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BISC209: Selektive, andor - und andor-angereicherte Medien Wellesley College-BISC 209 Mikrobiologie - Spring 2010 Willkommen zum Mikrobiologie-Labor Lesen Sie mich: Labor Sicherheit KalenderWeekly Planner Ressourcen OWW Grundlagen LAB 1: Mikrobiologie Boot Camp LABS 2-12: Boden-Gemeinschaften amp Diversity Projektzuweisungen Selektives Selektives Anreicherungsmedium Selektive Medien helfen, das Wachstum bestimmter Organismen in einer gemischten Population unter Verwendung eines Bestandteils, der das Wachstum von anderen Mikroorganismen hemmt, aber nicht die gewünschte Spezies oder Gruppe zu selektieren. Das Anreicherungsmedium wählt für bestimmte Mikroorganismen, indem es einen Nährstoff enthält, den der gewünschte Mikroorganismus oder die gewünschte Gruppe verwenden kann, und seine Konkurrenten können es nicht. (Manchmal Anreicherung Medien auch begrenzt alternative Quellen der Ernährung). Differentialmedien selektieren nicht für eine bestimmte Gruppe, indem sie ihr Wachstum gegenüber Konkurrenten hemmen oder verstärken, aber sie zeigen einen sichtbaren Unterschied zwischen oder unter Gruppen von Mikroorganismen. Einige Medien können sowohl selektiv als auch differenziell sein. Für weitere Informationen über die Formulierungen und Arten von Medien in der Mikrobiologie siehe: BD Diagnose-Systeme Difco Katalog der Medien bddstechnicalCenterinsertsdifcoBblManual. asp Selektive für Gram positive Organismen Phenylethyl Alkohol Agar (PEA) PEA wählt für das Wachstum von Gram-positiven Organismen durch die Hemmung des Wachstums von Gram-negative Bazillen. Der Phenylethylalkohol geht mit der DNA-Synthese in Gram-negativen Organismen einher. Dieses Medium ist besonders nützlich bei der Hemmung der Überwucherung von Gram-negativen Proteus-Spezies, die zum Schwärmen neigen (sie sind stark beweglich) und somit die Isolierung von Gram-positiven Organismen in einer gemischten Population schwierig machen. Rezept . 10 g Tryptose, 3 g Rinderextrakt, 5 g Natriumchlorid, 2,5 g Phenylethylalkohol, 15 g Agar auf 1 Liter destilliertes oder deionisiertes Wasser pH 7,1-7,5. Mannitol-Salz-Agar (eine Alternative zu PEA, nicht in 2010 verwendet) Postiver Kontrollorganismus: Staphylococcus epidermidis Selektiv für Gram-negative Organismen EosinMethylenblau (EMB) Agar ist ein Differenzmedium für den Nachweis von Gram-negativen enterischen Bakterien. Das Medium enthält Pepton-, Lactose-, Saccharose-, Dikaliumphosphat-, Eosin - und Methylenblau-Farbstoffe. Eosin und Methylenblau wirken als Indikatoren, um zwischen Gram-negativen Organismen, die Lactose fermentieren, und solchen, die Lactose nicht vergären, zu unterscheiden. Die meisten Bakterien, die Lactose fermentieren, bilden Kolonien auf EMB-Agar, die dunkelblau bis schwarz sind, mit einem metallischen Schimmer aufgrund der Ausfällung der Farbstoffe durch die sauren Nebenprodukte der Fermentation. Kolonien, die durch Lactose-Nichtfermenter erzeugt werden, sind nicht dunkelblau oder schwarz. Das Wachstum von Gram-positiven Bakterien wird im Allgemeinen auf EMB-Agar aufgrund der Toxizität des Methylenblau-Farbstoffs gehemmt. In geringer Konzentration verhindert die schützende Lipidaußenmembran von Gram-negativen Bakterien das Eindringen des toxischen wasserlöslichen Farbstoffs, während die porösere Zellwand von Gram-positiven Bakterien ohne die schützende äußere Membran sie für die Toxizität von Methylenblau empfindlicher macht. Rezept: 10 g Pepton, 10 g Lactose, 2 g Dikaliumphosphat, 0,4 g Eosin Y, 0,065 g Methylenblau 15 g Agar. PH-Wert 6.9-7.3 Tabelle 2. Koloniale Erscheinung auf EMB-Agar nach 18-24 Stunden bei 35 ° C. Ein differentielles Medium kann verwendet werden, um Gram-negative enterische Organismen auf der Grundlage der Koloniefarbe zu unterscheiden. SELEKTIVE UND DIFFERENZMEDIEN Viele verschiedene Arten von Medien werden im mikrobiologischen Labor verwendet. Im Allgemeinen können diese Medien in mehrere Kategorien, einschließlich nahrhaft, differenziert und selektiv unterteilt werden. Nährmedien sind definiert als Medientypen, die das Wachstum einer breiten Palette von Mikroorganismen unterstützen. Diese Arten werden typischerweise als nicht-selektiv aufgrund der Tatsache, dass sie die meisten Organismen zu wachsen. Beispiele für Nährmedien umfassen tryptisches Sojagar, Nährstoffagar und Blutagar. Differentielle Medientypen sind solche, die Mikroorganismen voneinander unterscheiden, basierend auf Wachstumsmerkmalen, die beim Wachstum auf spezifischen Medientypen offensichtlich sind. Organismen mit unterschiedlichen Wachstumsmerkmalen zeigen typischerweise sichtbare Wachstumsunterschiede, wenn sie auf Differentialmedien gelegt werden. Beispiele umfassen Blut-Agar, Eosin Methylen-Blau (EMB) - Agar, Mannitol-Salz-Agar und MacConkey-Agar. Selektive Medientypen werden formuliert, um das Wachstum einer Gruppe von Organismen zu unterstützen, hemmen aber das Wachstum eines anderen. Diese Medien enthalten antimikrobielle Mittel, Farbstoffe oder Alkohol, um das Wachstum der Organismen zu hemmen, die nicht für die Untersuchung bestimmt sind. Selektive Mediumtypen umfassen EMB-Agar, Mannitol-Salz-Agar, MacConkey-Agar und Phenylethylalkohol (PEA) - Agar. Einige Medien können sowohl selektive als auch differenzielle Eigenschaften besitzen, die es ihnen ermöglichen, bestimmte Gruppen von Organismen von Interesse zu wachsen und dem Untersucher eine Möglichkeit zu geben, Unterschiede in der Gruppe auf der Grundlage einer sichtbaren Reaktion mit den Medien zu unterscheiden. Diese Medien können leistungsstarke Diagnosewerkzeuge sowohl in medizinischen und Umwelt-Einstellungen. Eosin Methylen Blue Agar (EMB Agar) enthält die Farbstoffe Eosin und Methylenblau. Sie hemmen Gram-positive Organismen. Ein solches Medium ist für Gram-negative Spezies selektiv. Lactose-fermentierende Organismen, wie E. coli, erzeugen einen schwarzen Niederschlag auf EMB. Ihre Kolonien sind entweder schwarz oder besitzen dunkle Zentren mit transparenten, farblosen Peripherien. Nicht-Lactosefermenter wie Proteus sp. Salmonella sp. Oder Shigella sp. Erscheinen rosa oder ungefärbt. Somit wird das Medium als Differenz gegenüber der Lactosefermentation betrachtet. MacConkey-Agar ähnelt EMB-Agar, da es auch für Gram-negative Spezies selektiv ist und hinsichtlich der Lactose-Fermentation differenziert. MacConkey Agar wird für den Nachweis von Coliformen und enterischen Pathogenen auf der Grundlage ihrer Fähigkeit, Lactose zu fermentieren, verwendet. Laktose-fermentierende Bakterien erscheinen rot bis rosa, während nicht-lactose-fermentierende Bakterien als farblose oder transparente Kolonien erscheinen. Mannitol-Salz-Agar (7,5 NaCl) ist ein Medium selektiv für Staphylokokken und Differential in Bezug auf Mannitol-Fermentation. Das Wachstum der meisten anderen Bakterien als Staphylokokken, die halophil sind, wird durch die hohe Salzkonzentration im Medium gehemmt. Die Gärung von Mannitol wird nur in den pathogenen Spezies von Staphylococcos gesehen und wird durch die Produktion von sauren Produkten signalisiert, die Phenolrot in den Medien veranlassen, von einem neutralen rot-orange zu hellgelb zu wechseln. Nichtpathogene Staphylokokken produzieren kleine Kolonien, die von roten oder rosa-purpurroten Zonen umgeben sind, aufgrund der Produktion von basischen Produkten durch den Stoffwechsel. Phenylethylalkohol (PEA) - Agar ist ein selektives Medium, das das Wachstum der meisten Gram-negativen Organismen hemmt. Phenylethylalkohol dient dazu, die Lipidstruktur in der Membran von Gram-negativen Organismen zu stören sowie die Proteinsynthese zu hemmen, was zu einem schlechten Wachstum dieser Organismen auf dem Medium führt. Das Wachstum von Gram-negativen Organismen auf diesem Medium neigt dazu, verkümmert oder vollständig angehalten zu werden. Blut-Agar (5 Schaf-Blut-TSA-Platten) ist ein Nährmedium mit differentiellen Eigenschaften in Bezug auf Hämolyse. Hämolyse ist die Zerstörung von Erythrozyten (RBCs). Der Grad, in dem die Erythrozyten zerstört werden, kann durch die Wirkung von hämolytischen Enzymen auf die Zellen im Medium erkannt werden. Eine vollständige Aufteilung der RBCs wird als Beta (946) - Hemolyse bezeichnet und wird durch Clearing um die Kolonien, die das Hämolysin erzeugen, erkannt. Die partielle Zerstörung der RBCs führt zu einer grünlich-braunen Farbe auf dem Agar und wird alpha (945) Hämolyse genannt. Gamma (947) Hämolyse ist üblicherweise der Begriff, der auf das Wachstum auf Blutagar angewendet wird, der keine Schädigung der RBCs und keine Veränderung im Medium bewirkt. Teil 1: Selektiv - und Differenzialmedien Jede Tabellengruppe benötigt die folgenden 2 EMB-Agarplatten 2 MacConkey-Agarplatten 2 Mannitol-Salz-Agarplatte 2 PEA-Agarplatten Die Kulturen der folgenden Organismen werden geliefert: